丁基疏水色譜柱是一種用于生物大分子分離分析的高效色譜柱，主要應用于蛋白質(zhì)、單抗、酶等物質(zhì)的分離與純化。其核心結(jié)構(gòu)采用粒徑為2.5微米的丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質(zhì)作為填充劑，這種設計使其在保留機理上與反相色譜相似，但疏水性較弱，適合在非變性條件下保持生物分子的天然結(jié)構(gòu)。
該色譜柱具有高分辨率和快速分析的特點，例如TSKgel Butyl-NPR系列提供3.5厘米短柱和10厘米長柱兩種規(guī)格，分別適用于快速分析和高分辨率分離。其化學穩(wěn)定性優(yōu)異，能在較寬的pH值范圍內(nèi)保持性能穩(wěn)定，對痕量級別的多種蛋白均有很高的回收率，且可分離離子交換色譜法無法分離的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。
一、安裝與系統(tǒng)適配
流向與連接
嚴格按照色譜柱標示的箭頭方向連接入口和出口，避免反向流動導致柱效下降或損壞。
使用2.1mm內(nèi)徑色譜柱時，需優(yōu)化系統(tǒng)設計（如減少接頭死體積）以降低譜帶展寬。
初始流速控制
s次使用時，需用純乙腈在0.1mL/min流速下潤洗，隨后在2分鐘內(nèi)逐步提高至常規(guī)流速（如0.5mL/min），避免壓力驟變損傷填料。
二、流動相與緩沖液
流動相選擇
優(yōu)先使用新鮮潔凈的乙腈或異丙醇與水混合溶液，避免緩沖鹽殘留污染。系統(tǒng)沖洗時需確保無鹽分殘留。
可添加低濃度有機溶劑（如乙腈）促進疏水相互作用，同時控制離子強度（如硫酸銨或磷酸鹽緩沖液）。
pH值范圍
丁基柱在中性或弱酸性條件（pH 4-7）下穩(wěn)定性較好，高pH環(huán)境可能導致疏水平衡破壞或填料水解。
三、樣品處理與上樣
樣品預處理
去除雜質(zhì)（如離心、過濾）并調(diào)整樣品pH、離子強度至與流動相匹配，避免不可逆吸附或沉淀堵塞柱子。
避免過載上樣，建議根據(jù)柱效測試報告推薦的最大載量操作。
粘度與兼容性
高粘度樣品需稀釋或預熱至接近室溫，防止柱壓過高或分布不均。
四、操作參數(shù)控制
流速與壓力
常規(guī)分析流速不宜超過1mL/min（具體參考柱規(guī)格），避免高壓導致填料結(jié)構(gòu)破壞。
監(jiān)測柱壓，若異常升高需暫停并檢查是否堵塞或污染。
溫度控制
通常在室溫下操作，高溫可能加速填料老化或引起疏水特性變化。
五、維護與保存
沖洗與再生
使用后需用純乙腈或含少量有機溶劑的流動相沖洗管路和柱子，去除殘留樣品。
長期存放前，建議用20%乙醇或乙腈水溶液保存，防止微生物滋生或填料干燥裂解。
定期校準與測試
參考柱效測試報告，使用5-10倍柱體積的流動相平衡至基線穩(wěn)定，定期驗證分離效果（如塔板數(shù)、對稱因子）。
六、特殊注意事項
避免氣泡與干涸
流動相需充分脫氣，防止氣泡進入柱床；操作間隙可設置低壓保護或停泵，避免填料暴露于空氣。
化學兼容性
避免使用強氧化性溶劑（如濃硫酸、次氯酸鈉）或強堿性條件，防止化學腐蝕填料。
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